Plateforme d'immuno-phénotypage

Cet appareil est équipé de 5 lasers (laser violet (405 nm), laser bleu (488 nm), laser jaune/vert (561 nm), laser rouge (640 nm), laser UV (355 nm) permettant l'analyse de 2 paramètres physiques (taille/FCS et structure/SSC) et de 18 paramètres de fluorescence.

La configuration électronique permet l'acquisition de millions d'événements à une vitesse maximale de 20 000 evts/seconde.

La conception des systèmes d'acquisition des signaux taille/structure (tube photomultiplicateur sur FSC) ainsi que de la ligne d'échantillonnage et de la fluidique permet l'analyse d'événements cellulaires allant d'une très petite taille (0.1µm de diamètre, comme les bactéries) à 40-50 µm de diamètre.

L'Aurora CS de Cytek est un analyseur trieur basé sur la cytométrie spectrale. 

Cette technologie, permet de détecter un large éventail de de fluorescences simultanément. L’analyseur - trieur spectral est doté de 5 lasers (laser violet  (405 nm), laser bleu (488 nm), laser jaune/vert (561 nm), laser rouge (640 nm), laser UV (355 nm) et permet l'analyse de 2 paramètres physiques (taille/FCS et structure/SSC), et possède 64 détecteurs de fluorescence.

Cela permet une résolution fine et précise des différents marqueurs dans les échantillons, avec des capacités d'analyse jusqu'à 48 couleurs.

La conception du système d'acquisition de la « taille » permet de trier des entités cellulaires de très petite taille, à partir d'un diamètre de 0,1 µm (bactéries). De plus, la conception du système fluidique (ligne d'échantillonnage et buse) permet de trier des cellules de très grande taille, jusqu'à 130 µm de diamètre.

Cet équipement permet de trier simultané de 6 populations cellulaires différentes

La technologie CyTOF (Cytometry by Time-of-Flight) est une méthode d'analyse cellulaire qui repose sur la cytométrie de masse, qui utilise des anticorps et les sondes conjugués à des isotopes métalliques stables (non radioactifs) hautement purifiés, qui possèdent chacun une masse atomique relative unique (Dalton, Da).

 Les cellules marquées par des anticorps sont injectées dans un système combinant un cytomètre (le « Cy » de CyTOF) qui recueille, entraîne et injecte les cellules individuelles en gouttes uniques, dans  torche à plasma. Les nuages d'ions sont injectés un par un dans un spectromètre de masse. Le « temps de vol » (le « TOF » du CyTOF) identifie chaque ion d'isotope métallique présent dans le nuage.

La largeur du spectre de détection du TOF du CyTOF II (de 89 à 209 Da) permet d'analyser simultanément jusqu'à 120 paramètres en théorie, plus de 50 en pratique,.

Les cibles identifiées peuvent être des marqueurs de surface, des cytokines, des facteurs de transcription, des ARNm, des métabolites, dans la mesure où les sondes/anticorps peuvent être conjugués à des métaux lourds. À l'heure actuelle, une quarantaine de marqueurs peuvent être analysés de manière routinière et simultanée dans un échantillon.

Ce système de détection, notamment sa stabilité dans l'identification des isotopes par le TOF (masse unique) ainsi que l'absence d'interférences entre isotopes évite les compensations classiques entre fluorochromes nécessaires en cytométrie de flux. De plus, les métaux lourds utilisés étant extrêmement rares dans le règne vivant (sauf cas particuliers), il n'y a quasiment pas de signal de fond s'apparentant à de l'autofluorescence.

Un outil en ligne dédié et libre d'accès a été développé par Fluidigm® afin d'aider à l'élaboration et à l'optimisation des panels. Ce logiciel permet d'évaluer le « niveau d'expression de la cible/intensité de détection de l'isotope » pour chaque marqueur afin d'optimiser la sensibilité de détection dans un contexte multiparamétrique.